Распространенность пародонтопатогенной микрофлоры у больных хроническим пародонтитом в средней и южной полосе России

Анализ данных литературы показал отсутствие в отдельных этнических регионах Российской Федерации исследований, посвященных оценке роли в этиологии распространенности пародонтальной инфекции и частоты выявления пародонтопатогенных видов бактерий I порядка (A. actinomycetemcomitans, T. forsythia, P. gingivalis) и II порядка (P. intermedia, T. denticola, P. micros, F. nucleatum, E. corrodens и других). В то же время трудности лечения воспалительных процессов в тканях пародонта связаны с наличием устойчивых к терапии (торпидных) форм пародонтита, которые, в свою очередь, могут быть обусловлены длительной персистенцией пародонтопатогенных видов микробов (Царев В. Н. с соавт., 2006, 2010, 2011; Николаева Е. Н. с соавт., 2011; Tabanella G. е.а., 2009).

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Известно, что в областях средней и южной полосы России, в частности в Нижегородском регионе и Республике Дагестан, диагностика данных видов пародонтальной инфекции ранее не проводилась из-за отсутствия внедрения в практику соответствующих методов их выявления (ПЦР-диагностики). В то же время распространенность хронического пародонтита у взрослого населения Дагестана, особенно в сельской местности, крайне высока (52,9 %) по сравнению с равниной (37,5 %) и предгорьем (41,1 %), т. е. колеблется по экологическим зонам (Абдурахманов, Г.Г., 2009, Плахтий Л.Я., 2002).

Существенное значение в развитии патологии пародонта, по данным литературы, играют не только географические и социальные, но и этнические особенности распространенности определенных видов инфекционных агентов, причем их распространенность в отдельных этнических группах, в свою очередь, может быть связана с полиморфизмом генов, кодирующих синтез интерлейкинов (Царев В. Н., Николаева Е. Н., 2010; Behl Y. E.a., 2008; Duarte P.M. e.a., 2009).

Вопросы взаимосвязи генетического полиморфизма, иммунной реактивности организма и активизации тех или иных видов пародонтопатогенной флоры и, соответственно, разработка современных методов диагностики и лечения воспалительных заболеваний пародонта требуют дальнейшего изучения (Царев В. Н., Николаева Е. Н., 2010; Cафонова А. В. с соавт., 2011; Kilian M. e.a., 2006; Kinane D.F. e.a., 2011).

Учитывая вышеизложенное, разработка доступных критериев ранней диагностики воспалительных процессов в пародонте с помощью ПЦР у коренных народностей Российской Федерации, в частности в Дагестане, позволит дать практикующему врачу-стоматологу научно обоснованный подход к тактике ведения пациентов с заболеваниями пародонта, а также существенно повысить качество лечения с учетом региональных особенностей.

Чувствительность ПЦР-диагностики значительно выше, чем бактериологического метода (выше частота идентификации вирулентных видов), а такие клинически значимые виды пародонтопатогенов, как T. forsythia и T.denticola, ранее в отечественной лабораторной практике при культуральном исследовании не определяли (Плахтий Л. Я., 2002; Николаева Е. Н. с соавт., 2011).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Все пациенты дали информированное согласие на проведение клинических и лабораторных обследований. На основании разработанных критериев включения и исключения был сформирован массив, включающий пациентов, обследованных на базе стоматологических поликлиник г. Махачкалы и г. Нижнего Новгорода. Всего на лечение принято 170 пациентов с ХП и давностью заболевания до 3 лет (74 мужчины и 96 женщин в возрасте 25—56 лет). В том числе 92 больных ХП из Н. Новгорода (38 мужчин и 54 женщины).

Группы сравнения были сформированы по этническому признаку, а подгруппы по степени тяжести течения ХП. Пародонтит легкой степени тяжести (ХПЛ) был выявлен у 78 пациентов, а средней степени тяжести (ХПС) у 92 пациентов (табл. № 1).

Таблица № 1. Распределение пациентов по группам и подгруппам.

Пародонтальный статус
Всего пациентов
Группа
Группа 1 (аварцы и даргинцы) Группа 2 (славяне, г. Махачкала) Группа 3 (славяне,
г. Н. Новгород)
ХПЛ легкая (л) 78 1(л) 12 2(л) 14 3(л) 52
ХПС средняя (с) 92 1(с) 23 2(с) 29 3(с) 40
Итого 170 35 43 92

Контрольную группу составили 89 пациентов с интактным пародонтом, в том числе 53 человека из г. Махачкалы и 36 — из Н. Новгорода.

Всем пациентам проводили традиционное клиническое и рентгенологическое обследование пациентов: осмотр и определение гигиенического состояния полости рта — индекса гигиены (OHIS), папиллярно-маргинально-альвеолярного индекса (РМА); индекса кровоточивости десневой борозды (SBI), глубины пародонтального кармана с помощью методики зондирования, степени подвижности зубов и пародонтального индекса по A. Russel. Всем пациентам выполняли ортопантомограммы до начала лечения на ортопантомографе «Феникс» (Финляндия).

Лабораторные исследования проводили на базе лаборатории молекулярно-биологических исследований НИМСИ и кафедре микробиологии, иммунологии, вирусологии МГМСУ. Для проведения молекулярно-биологического исследования осуществляли взятие материалов: у здоровых — десневой жидкости, у больных пародонтитом — экссудата пародонтального кармана. Исследуемый материал отбирали до применения химиотерапевтических препаратов в наиболее глубоком участке пародонтального кармана.


У коренных народностей Дагестана частота выявления пародонтопатогенных бактерий 1-го порядка выше, чем у славянского населения Республики и славянского населения Н. Новгорода
  Перед взятием образцов удаляли наддесневые отложения стерильными кюретками. Место отбора образца осушали с помощью стерильного шарика ваты. Используя стерильные пинцеты, вводили стерильный бумажный эндодонтический штифт стандартного размера (№ 30) в самый глубокий участок пародонтального кармана, так чтобы исключить контакт со слизистой, поверхностью эмали или коронкой зуба, на 10 секунд, затем помещали его в стерильную пластиковую пробирку типа Eppendorf, содержащую 0,5 мл физиологического раствора. Перемешивали содержимое пробирки, удаляли зонд (Царев В. Н. с соавт., 2006).

Молекулярно-биологические исследования включали определение маркерной ДНК пародонтопатогенных видов 1-го порядка (Aggregatibacter actinomycetemcommitans (Actinobacillus) actinomycetemcomitans, Тannerella (Bacteroides) forsythia, Porphyromonas gingivalis) и 2-го порядка (Prevotella intermedia, Treponema denticola) с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для этого использовали отечественный набор реагентов «Мультидент-5» (НПФ «Генлаб», Россия).

Выявление прочих пародонтопатогенных видов 2-го порядка (Fusobacterium nucleatum/periodonticum, Parvimonas micra, Eikenella corrodens) проводили традиционным бактериологическим методом с применением техники анаэробного культивирования в анаэростате на 5%-ном кровяном гемин-агаре. Статистический анализ данных включал методы вариационной статистики с определением критерия Стьюдента для множественных сравнений и далее, использовались программы Exсel (MS Office) с учетом количества выборки, определяли вероятность различий р. Для непараметрических данных использовали программный пакет Biostat, включая критерий Х2. Статистически достоверным считали значения р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

На основании эпидемиологических, клинико-анамнестических, рентгенологических и лабораторных данных у пациентов выявляли степень тяжести заболевания при отсутствии острых или хронических соматических заболеваний в фазе обострения; а также при условии наличия полного комплекса данных клинико-лабораторного обследования, что позволило сформировать три группы сравнения больных ХП: 1 — жители г. Махачкалы коренных народностей (аварцы и даргинцы), 2 — жители г. Махачкалы славянской национальности, 3 — жители г. Н. Новгорода славянской национальности (см. табл. № 1).

Всем пациентам (n=170), которым в результате комплексного обследования был поставлен диагноз ХП, проводили этиологическую диагностику с помощью молекулярно-биологического метода (ПЦР-диагностики), то есть охват пациентов применением данного метода исследования составил 100 %.

При проведении ПЦР-диагностики выявляли генетические маркеры пяти основных пародонтопатогенных видов анаэробных грамотрицательных бактерий, которые по современной рабочей классификации (Николаева Е. Н. c соавт., 2011) могут быть отнесены к трем пародонтопатогенным видам 1-го порядка (Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Tannerella (Bacteroides) forsythia, Porphyromonas gingivalis) и двум пародонтопатогенным видам 2-го порядка (Prevotella intermedia, Treponema denticola).

По данным молекулярно-биологического исследования (табл. № 2) установлена достоверная разница выявления в материале пародонтальных карманов пациентов маркерной ДНК всех пародонтопатогенных видов 1-го порядка, а также ДНК одного представителя пародонтопатогенных видов 2-го порядка — Treponema denticola у группы сравнения 1 (коренные народности Дагестана) по сравнению с группами сравнения 2 и 3 (славянское население Дагестана и Н. Новгорода соответственно).

Таблица № 2. Частота выявления маркерной ДНК пародонтопатогенных видов 1-го и 2-го порядков у жителей Южной России разной этнической принадлежности (абс. — %).

Вид пародонтопатогена
Гр. 1. Аварцы и даргинцы (n=59)
Гр. 2. Славяне, Махачкала (n=52)
Гр. 3. Славяне, Н. Новгород (n=92)
A. actinomycetemcomitansI 21 – 35,6 13 – 25,0* 24 – 26,1*
T. forsythia I 41 – 69,5 20 – 38,5* 72 – 78,3
P. gingivalis I 43 – 72,9 21 – 40,4* 44 – 47,8*
P.intermedia II 25 – 42,4 19 – 36,5 30 – 32,6
T. denticola II 38 – 64,4 18 – 34,6* 44 – 47,8*
E. corrodens II 8 – 13,6 5 – 9,6 10 – 10,9
F.nucleatum II 34 – 57,6 20 – 38,5* 34 – 36,9*
P. micra II 12 – 20,3 13 – 25,0 20 – 21,8

Примечания: I, II — порядок пародонтопатогенных бактерий. * Различия статистически достоверны с 1-м столбцом p<0,05.

Так, частота выделения A. actinomycetemcommitans у коренного населения Дагестана (группа 1) составляла 35,6 %, а у славянского населения групп 2 и 3 не различалась между собой и была в 1,4 раза ниже (25—26 %), чем у коренных народностей Дагестана.

Доминирующими пародонтопатогенами 1-го порядка по частоте выделения были T. forsythia и P. gingivalis. Их выявляли в группе 1 с частотой 69,5 и 72,9 % соответственно. Выделение этих же видов у славянского населения г. Махачкалы было почти в 2 раза ниже, а у славянского населения Н. Новгорода статистически достоверно ниже была частота выделения P. gingivalis (47,8 %), в то время как частота выделения T. forsythia была такой же высокой, как и у коренных народностей Дагестана в г. Махачкале (78,3 %).

Большая часть пародонтопатогенных видов 2-го порядка не различалась по частоте выделения в группах 1, 2 и 3. Только T. denticola выделяли почти в 2 раза чаще у пациентов группы 1 (64,4 %) по сравнению с группами 2 и 3 (34,6 и 47,8 %) соответственно.

По данным бактериологического исследования, аналогичным образом достоверно различалась также и частота выявления F. nucleatum. В группе 1 частота выделения данного вида составила 57,6 %, а в группах 2 и 3 — 38,5 и 36,9 % соответственно, то есть достоверно ниже. В 15 % случаев у пациентов из региона Н. Новгород вообще не выявлено маркеров ДНК исследуемых пародонтопатогенов.

Как показали наши исследования с применением иммуноферментного определения уровня интерлейкинов плазмы крови и десневой жидкости, проведенные у пациентов г. Махачкалы, частота выявления некоторых пародонтопатогенных видов бактерий коррелировала с уровнем провоспалительных цитокинов Ил-1β и Ил-6 (Ипполитов Е. В. с соавт., 2012).

Таким образом, выявлены определенные закономерности частоты выявления пародонтопатогенных видов, которые могут быть сформулированы следующим образом. У пациентов группы 1 (коренные народности Дагестана) частота выявления всех пародонтопатогенных бактерий 1-го порядка статистически достоверно выше, чем у славянского населения Республики Дагестан (группа 2) и славянского населения региона Н. Новгород (группа 3). В полной мере это касается также и двух пародонтопатогенных видов 2-го порядка — T. denticola, F. nucleatum.

Следующим принципиальным вопросом, который мы исследовали в настоящей работе, является частота выявления ассоциаций разных пародонтопатогенных видов и степени тяжести ХП. Распределение частоты выявления ассоциаций детально изучено нами на наиболее большом массиве пациентов — 92 человека региона Н. Новгород (рис. 1). Распределение частоты ассоциаций было следующим (рис. 2).

Отсутствовали маркеры пародонтопатогенных бактерий у 6 человек с диагнозом ХГП легкой степени — 11,5 %. Всего из 92 обследованных диагноз ХП легкой степени был поставлен 52 пациентам, что составило 56,5 %. Частота встречаемости маркерной ДНК одного вида пародонтопатогена отмечена в 19,2 % случаев (у 10 больных ХП легкой степени); частота встречаемости маркерной ДНК двух видов пародонтопатогенов — в 38,5 % (20 больных ХП легкой степени). При этом по частоте встречаемости доминировали пародонтопатогенные виды 1-го порядка — T. forsythia и P. gingivalis.

Частота выявления ассоциаций нескольких видов у больных ХП легкой степени была следующей: ассоциации из трех видов пародонтопатогенов — у 6 (11,5 %), ассоциации из четырех видов пародонтопатогенов — у 10 человек (19,2 %). Маркеры пяти видов пародонтопатогенных грамотрицательных анаэробных бактерий не выявили ни в одном случае.

Диагноз ХП средней степени тяжести в стадии обострения был поставлен 40 пациентам из 92 больных, что составило 43,5 %.


Для уточнения этиологии ХП с целью обоснованного назначения как местного, так и системного антибактериального лечения показано проведение мультиплексной полимеразной цепной реакции
Выявление маркерной ДНК одного вида пародонтопатогенов отмечено у 4 больных ХП средней степени тяжести, то есть в 10 % случаев. Маркеры двух видов пародонтопатогенных грамотрицательных анаэробных бактерий не выявлены. Частота выявления ассоциаций нескольких видов у больных ХП средней степени тяжести: ассоциации трех видов пародонтопатогенов выявлены у 14 человек (35 %); ассоциации из четырех видов пародонтопатогенов также у 14 больных (35 %). Частота выявления разных видов была примерно одинаковой с некоторым преобладанием P. intermedia. Маркеры пяти видов пародонтопатогенных грамотрицательных анаэробных бактерий не выявлены.

У 8 больных с объективными клиническими признаками ХП средней степени в стадии обострения, то есть в 20 % случаев, не было выявлено ни одного маркера ДНК исследуемых видов пародонтопатогенов.

Полученные нами данные позволяют сделать заключение, что у 14 больных (15,2 %) из 92 (100 %) обследованных с ХП в Н. Новгороде с помощью метода ПЦР-диагностики не выявлено ни одного маркера пародонтопатогенной микрофлоры из числа представленных в диагностическом наборе «МультиДент-5».

Как свидетельствуют данные литературы, последнее может быть объяснено амфихиральностью микробной этиологии пародонтита, в частности ролью других пародонтопатогенных видов 2-го порядка, выявление маркерной ДНК которых не предусмотрено диагностическим набором «МультиДент-5», например Fusobacterium nucleatum/periodonticum, Eikenella corrodens, Parvimonas (Peptostreptococcus) micros и некоторых других.

Кроме того, это может быть связано также и с другими этиологическими фактороми данного заболевания, например грибами кандида, вызывающими кандида-ассоциированный пародонтит. Нельзя также исключить пародонтит, ассоциированный с герпес-вирусной инфекцией (Царев В. Н. с соавт., 2006, 2010, 2011).

ВЫВОДЫ

  1. Относительная частота выявления в пародонтальных карманах у славянского населения Махачкалы и Н. Новгорода ДНК пародонтопатогенных видов 1-го порядка A. actinomycetemcomitans, T. forsythia, P. gingivalis, а также двух видов 2-го порядка — T. denticola и F. nucleatum — в 1,4—2 раза ниже, чем у коренного населения Республики Дагестан (г. Махачкала). В 15 % случаев не выявлено маркеров ДНК исследуемых пародонтопатогенов.
  2. При ХП легкой степени у 50 % пациентов выявляются один-два пародонтопатогенных вида, преимущественно 1-го порядка: T. forsythia и P. gingivalis. При ХП средней степени тяжести — лишь в 10 % случаев, причем преобладала полиинфекция с участием пародонтопатогенных видов как 1-го, так и 2-го порядка.
  3. Для уточнения этиологии ХП с целью обоснованного назначения как местного, так и системного антибактериального лечения показано проведение мультиплексной полимеразной цепной реакции, позволяющей выявить генетические маркеры основных видов пародонтопатогенных бактерий 1-го и 2-го порядка.

ЛИТЕРАТУРА

  1. Абдурахманов Г. Г. Распространенность и тактика лечения пародонтита в Республике Дагестан: автореф. дисс. … канд. мед. наук. — М., 2009. — 25 с.
  2. Ипполитов Е. В., Азизова С. А., Коробова Е. А., Арутюнов С. Д., Царев В. Н. Цитокиновый профиль десневой жидкости при хроническом пародонтите у жителей Дагестана // Dental Forum. — 2012, № 5. — С. 60—61.
  3. Николаева Е. Н., Царев В. Н., Ипполитов Е. В. Пародонтопатогенные бактерии — индикаторы риска возникновения и развития пародонтита (часть II) // Стоматология для всех. — 2011, № 4. — С. 4—7, 24—36.

Полный список литературы находится в редакции.

comments powered by HyperComments
Похожие статьи
Аллергическое действие композитных материалов на ткани пародонта...
04 апреля 2010
2236
Т. Н. Власова к. м. н., доцент кафедры терапевтической стоматологии СтГМА А. В. Оганян ассистент кафедры терапевтической стоматологии СтГМА Л. Г. Тагиева студентка 5-го...
Особенности применения пародонтальных повязок в клинической практике
07 июля 2010
6348
Д. Р. Мушарапова студентка 4-го курса стоматологического факультета ГОУ ВПО «Казанский ГМУ» Росздрава Л. Р. Мухамеджанова д. м. н., доцент, заведующая кафедрой...
Антиоксидантный препарат в комплексном лечении язвенно-некротических процессов...
09 сентября 2010
1252
К. Г. Караков профессор, заведующий кафедрой терапевтической стоматологии СтГМА Т. Н. Власова к. м. н., доцент кафедры терапевтической стоматологии СтГМА А. В. Оганян ассистент...