Уровень микробной контаминации, скорость слюноотделения и мукозальный иммунитет полости рта спортсменов олимпийского резерва

Ж. И. Кузьмина
аспирант кафедры терапевтической стоматологии ГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» Минздрава России

Л. Р. Мухамеджанова
д. м. н., профессор кафедры пропедевтики стоматологических заболеваний и новых технологий ФГБОУ ВПО ЧГУ И. Н. Ульянова (Чебоксары), научный консультант центра заболеваний СОПР «Эксклюзив-Дент» (Казань)

Л. Т. Баязитова
к. м. н., заведующая лабораторией микробиологии ФБУН «Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Роспотребнадзора

Одной из важнейших проблем спортивной медицины является сохранение здоровья, в том числе стоматологического, и повышение качества жизни спортсменов [2, 3]. В настоящее время имеется множество публикаций отечественных и зарубежных ученых о последствиях высокоинтенсивных и продолжительных физических нагрузок на организм. Они выражаются в ослаблении иммунитета и, как следствие, в возникновении и прогрессировании заболеваний, в генезе которых ключевую роль играют инфекционные агенты. В течение последних десятилетий у спортсменов, занятых в спорте высших достижений, участились случаи выявления особой группы скрытых, или компенсированных иммунодефицитов. Последние проявляются в стрессовых ситуациях внезапным срывом адаптации. Обострения хронической очаговой инфекции знаменуют собой крайнее проявление срыва адаптации, способствуя еще большему усилению иммунодепрессии [3, 5, 6].

Несмотря на то, что спортсмены олимпийского резерва находятся под строгим врачебным наблюдением, диагностика воспалительных заболеваний пародонта, а также ранние выявления заболеваний не находят должного внимания или остаются вне поля зрения специалистов по спортивной медицине. Известно [1, 4], что при снижении уровня мукозального иммунитета условно-патогенные микроорганизмы, вегетирующие на поверхности различных биотопов полости рта, усиливают свою активность, что приводит к обострению хронических воспалительных заболеваний пародонта (генерализованных форм гингивита и пародонтита).

Целью настоящего исследования явилась оценка функциональной активности слюнных желез и степени микробной контаминации биотопов полости рта спортсменов олимпийского резерва.

Материалы и методы

Было обследовано 33 спортсмена-единоборца олимпийского резерва в период интенсивных тренировок подготовительного периода тренировочного цикла (91 % — юноши и 9 % — девушки) в возрасте 19—21 года (средний возраст составил 19,5±1,5 года).

Средний стаж профессиональных занятий спортом — 12,8±2,4 года. Условия проживания, питания, график соревнований на момент обследования были одинаковы для всех испытуемых (исследования проведены на базе ГБОУ СПО «Училище олимпийского резерва» (Казань). Все испытуемые подтвердили свое согласие на проведение исследований. В зависимости от отягощенности обследуемых хроническими воспалительными заболеваниями пародонта (ХВЗП) было проведено ранжирование на 2 группы: первую (исследуемую) группу (n=20) составили пациенты, отягощенные ХВЗП. Диагноз хронического генерализованного пародонтита был верифицирован данными клинического и лучевого исследования — радиовизиографической панорамной рентгенографии. Вторую (контрольную) группу составили пациенты с интактным пародонтом (n=13).

Для оценки гигиенического состояния полости рта использовали индексы по Ю. А. Федорову — В. В. Володкиной, Quigley — Hein и Силнесс — Лоэ; оценки состояния тканей пародонта — индексы РМА в модификации Parma, йодное число Свракова, индекс кровоточивости Мюллемана — Коуэлла.

Сиалометрию проводили следующим образом: слюну собирали в градуированную стеклянную пробирку путем сплевывания в течение 5 минут (нестимулированная сиалометрия) до начала тренировки и после ее окончания. Полученный объем делили на 5 и получали значение скорости саливации, выраженное в мл/мин.

C целью определения уровня мукозального иммунитета изучали содержание секреторного иммуноглобулина А в ротовой жидкости. Полученные образцы ротовой жидкости хранили в микротубах на 2,5 ml в рефрижераторе при T -25 C.Определение концентрации белка в ротовой жидкости осуществляли по Bradford М.М. [7] после предварительного центрифугирования аликвот при 3880?g, 15 минут. Концентрацию белка рассчитывали, используя калибровочную кривую, в качестве белка-калибратора использовали бычий сывороточный альбумин (БСА, Sigma, USA). Концентрацию белка выражали в мг/л.

Концентрацию sIgAопределяли твердофазным иммуноферментным методом с помощью тест-системы «IgA секреторный-ИФА-Бест» (Россия), где на твердой полистироловой основе иммобилизованы моноклональные антитела к секреторному компоненту sIgA человека. В качестве стандартов использованы в наборе к тест-системе калибровочные образцы sIgA человека фирмы ISN(США) в концентрации 1, 2, 5, 10, 20 мг/л. Перед определением концентрации sIgA в ротовую жидкость центрифугировали при 3880 ?g, 15 минут. Центрифугат разводили в 2000 раз и определяли концентрацию sIgA c учетом разведения. Рассчитывали показатель относительного содержания sIgA в пробах ротовой жидкости, используя формулу:

А (sIgA) =CsIgA (мг/л) : С белок (мг/л), где:

С sIgA (мг/л) — концентрация секреторного иммуноглобулина А, определенного иммуноферментным методом в пробах с учетом разведения; С белок (мг/л) — концентрация общего белка в пробах, определенная по методу Bradford, M.M.

С целью изучения степени микробной контаминации полости рта забирались мазки с пришеечной области вестибулярной поверхности моляров верхней челюсти, язычной поверхности моляров нижней челюсти с помощью клиновидных полосок стерильной фильтровальной бумаги общей площадью 1 кв. см. Забор материала проводился двукратно: до тренировки и по окончании тренировки. После 2—3-минутной экспозиции полученный биоматериал помещали в пробирки с транспортной средой, после чего транспортировали в отделение микробиологии ФБУН «Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Роспотребнадзора. Биоматериал засевался на плотные и полужидкие питательные среды для культивирования микроорганизмов в аэробных и анаэробных условиях. Применен следующий набор сред: 5%-ный кровяной агар, Сабуро, Эндо, стрептококковый селективный агар, желточно-солевой агар, тиогликолевая среда, MRSагар. Идентификацию микроорганизмов осуществляли по морфологическим, биологическим и биохимическим свойствам в соответствии с нормативными документами. Использовали количественный метод микробиологического исследования микробиоценоза: количество выросших колоний микроорганизмов выражали в КОЕ / кв. см.

Статистическая обработка результатов исследования проведена в среде табличного редактора MsExcel 2007; рассчитывали среднюю арифметическую, ошибку средней величины и двухвыборочный t-тест для средних величин с различными дисперсиями.

Результаты проведенных исследований

При изучении особенностей гигиенического статуса пациентов исследуемой группы установлено (табл. № 1), что в 90 % случаев мягкий зубной налет локализовался во фронтальных отделах зубного ряда (в контрольной группе — в дистальных отделах), что обусловлено преимущественно ротовым дыханием в период тренировок и, как следствие, усиленным испарением влаги с поверхности твердых тканей зубов, дорсальной поверхности языка, лабиальной и буккальной слизистых оболочек.

Таблица № 1. Значения гигиенических и пародонтологических индексов у пациентов исследуемой группы

Индексы	Спортсмены с интактным пародонтом,n=13	Спортсмены  с воспалительными заболеваниями пародонта, n=20
Гигиенические
Индекс Федорова — Володкиной, баллы	1,82±0,45	2,92±0,72 p<0,05
Индекс Quigley Hein, баллы	2,12±0,52	4,81±1,23 p<0,05
Индекс Силнесс — Лое, баллы	1,32±0,32	2,81±0,72 p<0,05
Пародонтологические
PMA, %	0,21±0,05	36,72±9,18 p<0,001
Индекс Свракова, баллы	0,85±0,22	7,21±1,82 p<0,001
Индекс Мюллемана — Коуэлла, баллы	0,14±0,02	2,33±0,62 p<0,01

У 18 спортсменов были выявлены обильные минерализованные над- и поддесневые отложения. Цвет отложений варьировал от светло-желтого до темно-коричневого. Выраженность воспалительных процессов также превалирует (различие, статистически достоверное) у пациентов с ХВЗП; у пациентов контрольной группы получены значения, отличные от нулевых, что обусловлено локальными воспалительными процессами (локализованный гингивит вследствие травмирования маргинального пародонта нависающими краями пломб).

Выявленные генерализованные и локализованные поражения пародонта воспалительного характера были в хронической стадии, лишь у 4 пациентов исследуемой группы — в состоянии обострения (пародонтальные абсцессы). 92 % спортсменов отмечали ухудшение состояния пародонта в период подготовки к старту или в период выездных тренировок: кровоточивость десны, усиление неприятного запаха изо рта, металлический или кисло-соленый привкус в полости рта, что связано с нарушением привычного режима гигиенического ухода за полостью рта.

Анализ данных, полученных при сиалометрии, свидетельствуют о том, что до начала тренировки скорость фоновой секреции составила 1,24±0,02 мл/мин, что сопоставимо с аналогичным показателем контрольной группы — 1,28±0,04 мл/мин. (p>0,05).

После окончания тренировки наблюдалось значительное снижение скорости саливации — 0,42±0,01 мл/мин. (p<0,01). Спустя 4 часа после окончания тренировки скорость саливации увеличивалась, однако не достигала исходных значений — 0,88±0,02 мл/мин. (p<0,05). Отметим, что при изучении функциональной активности слюнных желез нами не выявлено достоверной разницы в значениях скорости саливации у пациентов исследуемой и контрольной групп. Содержание секреторного иммуноглобулина А в ротовой жидкости имело значительные отличия. Так, относительное содержание sIgA у пациентов с интактным пародонтом составило до тренировки 0,70, по окончании тренировки — 0,64 (p>0,05). У пациентов с ХВЗП уровень sIgA до тренировки составил 0,43 (p<0,05 по сравнению с контролем), по окончании тренировки — 0,24 (p<0,01).

Результаты изучения степени микробной контаминации (табл. № 2) свидетельствуют о том, что у пациентов исследуемой группы после тренировки наблюдается увеличение роста эпидермального, золотистого и гемолитического стафилококка, зеленящего и пиогенного стрептококка. Аналогичная картина прослеживается в отношении кандиды, клебсиеллы и кишечной палочки. У пациентов контрольной группы выявлено увеличение роста золотистого и гемолитического стафилококка, зеленящего стрептококка, энтерококка, кишечной палочки и бифидобактерий.

Таблица № 2. Сравнительная оценка микробного пейзажа полости рта спортсменов олимпийского резерва до тренировки и после ее окончания

Высеваемая микрофлора	Исследуемая группа (n=20)		Контрольная группа (n=13)
Этап забора материала	До тренировки	После тренировки	До тренировки	После тренировки
Стафилококк эпидермальный	10? КОЕ/см?	103 КОЕ/см?	не выявлен	не выявлен
Стафилококк золотистый	103 КОЕ/см?	104 КОЕ/см?	не выявлен	102 КОЕ/см?
Стафилококк гемолитический	единичные колонии на обогащенных средах	10? КОЕ/см?	не выявлен	10? КОЕ/см?
Стафилококк коагулазоотрицательный	умеренный рост колоний на обогащенных средах	10? КОЕ/см?	не выявлен	не выявлен
Стрептококк ? — гемолитический	10? КОЕ/см?	10? КОЕ/см?	не выявлен	не выявлен
Стрептококк пиогенный	10? КОЕ/см?	104 КОЕ/см?	не выявлен	не выявлен
Стрептококк зеленящий	10? КОЕ/см?	10? КОЕ/см?	не выявлен	10? КОЕ/см?
Стрептококк негемолитический	умеренный рост	10? КОЕ/см?	не выявлен	не выявлен
Энтерококки	103 КОЕ/см?	104 КОЕ/см?	не выявлен	10? КОЕ/см?
Грибы рода Candida	рост единичных колоний	10? КОЕ/см?	не выявлен	рост единичных колоний
Клебсиеллы	10? КОЕ/см?	104 КОЕ/см?	не выявлен	не выявлен
Кишечная палочка	рост единичных колоний	102 КОЕ/см?	не выявлен	рост единичных колоний
Бифидобактерии	102 КОЕ/см?	103 КОЕ/см?	не выявлен	умеренный рост
Анаэробные пептострептококки	скудный рост	умеренный рост	не выявлен	не выявлен

Сложившуюся ситуацию можно объяснить тем, что при интенсивных физических нагрузках у спортсменов преобладает ротовой тип дыхания, что усиливает испарение влаги с поверхности слизистой оболочки полости рта. Кроме того, при такого рода нагрузках усиливается выработка адреналина, кортизола, оказывающих угнетающее действие на функциональную активность слюнных желез. Создаются благоприятные условия для накопления бактерий на фоне недостаточного естественного самоочищающего эффекта ротовой жидкости (о чем свидетельствует низкий уровень sIgA). Поскольку тренировки у спортсменов высокой квалификации имеют значительную продолжительность (от 3 до 5 часов), актуальны разработка и внедрение методов поддержания «уровня влажности» и гигиенического состояния полости рта.